Նուկլեինաթթվի սինթեզն իրականացվում է պինդ ֆազային սիալիկ ամիդի տրիգլիցերիդի մեթոդով, որի շնորհիվ ԴՆԹ-ի 3' ծայրը անշարժացվում է պինդ ֆազային սուբստրատի վրա և նուկլեոտիդները ավելացվում են 3'-ից 5' ուղղությամբ մինչև ցանկալի ԴՆԹ-ի բեկորը սինթեզվի: .Սա ԴՆԹ-ի սինթեզից տարբերվում է ԴՆԹ պոլիմերազի կիրառմամբ:
Առաջին հիմքի 3' ծայրը սինթեզի ընթացքում անշարժացված է CPG-ի վրա, հաջորդ հիմքի 5'-OH-ը պաշտպանված է դի-պ-տոլիլ տրիտիլ DMT-ով, հիմքի վրա գտնվող ամինո խումբը պաշտպանված է բենզոաթթվով և 3'-ով: -OH-ն այնուհետև ակտիվանում է ամինաֆոսֆատային միացությամբ:1 բազայի 5 5'-OH-ի 1 հիմքը և հաջորդ հիմքի 3'-OH-ը ձևավորում են ֆոսֆիտ տրիգլիցերիդ, որն այնուհետև յոդի հետ օքսիդացվում է ֆոսֆատային տրիգլիցերիդի, իսկ երկրորդ հիմքի 5'-OH պաշտպանիչը հեռացվում է ավելացնելով դիքլորաքացախաթթվի DM ցիկլը հաջորդ հիմքի ավելացման միջոցով, և սինթեզից հետո 5'-OH-ի վրա պաշտպանող նյութը հեռացվում է թույլ թթվով: Բեկորն անջատվում է պինդ խեժից խտացված ամոնիումի հիդրօքսիդով, պաշտպանիչը հանվում է հիմքից: տաքացման տակ խտացված ամոնիումի հիդրօքսիդի դեպքում ամոնիումի հիդրօքսիդը հանվում է, բեկորը չորանում է վակուումով, իսկ նուկլեինաթթուն մաքրվում է հեղուկ քրոմատագրմամբ կամ PAGE-ով։
Օլիգո սինթեզի քայլեր
Ապաշրջափակում
Այն5 վերջի DMT պաշտպանիչ խումբը հեռացվում է TCA լուծույթի ավելացմամբ:
Ակտիվացում
Ակտիվատորը օլիգոնուկլեոտիդային մոնոմերի հետ խառնելով՝ ձևավորվում է ակտիվ օլիգոնուկլեոտիդային մոնոմերի միջանկյալ նյութ:
Զուգավորում
5-տերմինալ հիդրօքսիլ խումբը արձագանքում է ակտիվ օլիգոնուկլեոտիդային միջանկյալ նյութի հետ հակագեներատիվ խտացման ռեակցիայի մեջ՝ ձևավորելով անկայուն ֆոսֆիտ տրիգլիցերիդային կապ:
Կափարիչ
Կափարիչ նյութի ավելացումն իրականացնում է ացետիլացման ծածկման ռեակցիա ավելցուկային հիդրօքսիլ խմբերով, որոնք ներգրավված չեն խտացման ռեակցիայի մեջ:
Օքսիդացում
Ջուր պարունակող յոդի լուծույթի ավելացումը օքսիդացման միջոցով փոխազդում է անկայուն ֆոսֆիտային կապերի հետ՝ ձևավորելով կայուն ֆոսֆորաթթվի տրիգլիցերիդային կապեր։
Ցիանոէթիլային ճեղքվածք
Նուկլեինաթթվի արտադրանքը սինթեզից հետո՝ DEA լուծույթի ավելացմամբ՝ ցիանոէթիլ խումբը ֆոսֆատ տրիգլիցերիդային կապից հեռացնելու համար։
Cleaved&Deprotection
Նուկլեինաթթվի բեկորները կտրվում են պինդ փուլային կրիչից՝ ավելացնելով ամոնիումի հիդրօքսիդի խտացված լուծույթ, այնուհետև տաքացնում են՝ հիմքերի ջրածնային կապերից պաշտպանող խմբերը հեռացնելու համար:
Հրապարակման ժամանակը՝ նոյ-21-2022